革蘭氏染色液操作步驟

產(chǎn)品簡介：

革蘭氏染色法是丹麥醫(yī)生 Christain Gram 于 1884 年所發(fā)明，是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法，亦是一種復染法，未經(jīng)染色的細菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察，染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，用以分類鑒定，通過此法染色可將細菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。細菌的不同顯色反應是由于細胞壁對乙醇的通透性和抗脫色能力的差異，主要是肽聚糖層厚度和結(jié)構(gòu)決定的，經(jīng)結(jié)晶紫染色的細胞用碘液處理后形成不溶性復合物，乙醇能使它脫色，在革蘭陰性細胞染色中乙醇或丙酮破壞了胞壁外膜、損傷肽聚糖層和細胞質(zhì)膜，結(jié)晶紫和碘復合物從細胞中滲漏出來，當再用其他染色液復染時，顯現(xiàn)紅色；紅色染料雖然也能進入已染成紫色的 G+細胞，但被紫色蓋沒，所以紅色顯示不出來；在革蘭陽性細胞染色中，乙醇還能使厚的肽聚糖層脫水，導致孔隙變小，由于結(jié)晶紫和碘復合物分子太大，不能通過細胞壁，不易脫色，所以保持著紫色。

 Standard Gramˊs Stain 采用最經(jīng)典的革蘭染色配方, 臨床標本直接涂片，背景干凈，胞核胞質(zhì)對比強烈，胞內(nèi)吞噬體清晰易辨認，細菌染色特征典型。該試劑僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、接種環(huán)或挑取細菌的其他工具、

2、酒精燈、載玻片、光學顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

1、涂片：取待檢細菌，于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無菌水，取菌與的水混合均勻，涂成一薄層。

2、干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥。

3、固定：手持載玻片一端，標本面朝上，在酒精燈的火焰外側(cè)快速來回移動3~5 次，每次 1s，溫度不宜過高，防止菌體蛋白變性，放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

4、初染：滴加結(jié)晶紫染色液染色 1~2min，清水沖洗去染色液。

5、媒染：滴加 Gram 碘液，并覆蓋載玻片，室溫放置 1~2min，水洗。

6、脫色：滴加脫色液，搖動 10～30s，直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色時為止，立即用水沖去脫色液，終止反應。

7、復染：滴加沙黃染色液染色 30~60s，水洗。

8、干燥，鏡檢：置油鏡觀察。

注意事項：

1、本產(chǎn)品經(jīng)過濾處理，如有少量沉淀或不溶物，可靜置后取上清或過濾后使用。

2、涂片之前，應事先在背面做好圓圈標記，以便判斷后續(xù)試驗的位置。

3、取細菌時，應注意自我防護，拔或塞試管塞時，應將試管口通過火焰略加燒灼，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

4、加熱固定涂片時，應注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜。

5、革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴格掌握脫色程度，脫色時間應根據(jù)經(jīng)驗判斷。脫色過度，陽性菌可被誤染為陰性菌；脫色不夠，陰性菌可被誤染為陽性菌。

6、待檢細菌培養(yǎng)時間會影響染色，陽性菌培養(yǎng)時間過長或已死亡或細菌溶解，常呈陰性。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。